Theundifferentiatedstateofembryonicstem(ES)andinducedpluripotentstem(iPS)cellscanbecharacterizedbyahighlevelofalkalinephosphatase(AP)expressionwhich,alongwiththeexpressionofothersurfaceMarkers,indicatesundifferentiatedcellswiththepotentialtoself-renew.APisahydrolaseenzymeresponsIBLefordephosphorylatingmoleculessuchasnucleotides,proteins,andalkaloidsunderalkalineconditions.WhenfixedESoriPScellsarestainedusingtheAPStainingKit,undifferentiatedcellsappearredorpurple,whereasdifferentiatedcellsappearcolorless.
50assays
FixSolution:25ml
APStainingSolutionA:10ml
APStainingSolutionB:10ml
Storeat4°C.Donotfreeze.Stablefor6monthsfromdateofreceiptwhenstoredasdirected.
TheAPStainingKitisfunctionallytestedonhumanandmouseEScellstoensureproductquality.
产品特点
Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System只需2周即可将靶细胞重编程为iPS细胞,与仙台病毒(Sendai Virus)、非整合型DNA载体(Episomal DNA Vectors)等传统iPS重编程方法相比,缩短实验周期超过50%以上(Figure. 1)。
Figure 1. Stemgent® mRNA重编程系统、仙台病毒依赖的重编程系统以及游离型DNA载体依赖的重编程系统重编程时程比较。
与病毒、DNA载体依赖的iPS重编程手段不同,使用Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System对靶细胞进行重编程,生成的iPS细胞无需进行复杂耗时的下游筛选程序,只需简简单单6个步骤,即可轻松构建iPS细胞系。
Description | Day | |
Step 1 | Material Preparation | Prior to starting |
Step 2 | Plate Cells | 0 |
Step 3 | Transfect Cells | 1 to 12 |
Step 4 | Identify Cells | 13-14 |
Step 5 | Pick and Passage iPS Cell Colonies | 15-16 |
Step 6 | Maintain iPS Cell Cultures | 16+ |
注:因所用细胞类型及实验条件不同,上述时间轴可能略有不同,仅供参考。
Figure 2. Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System重编程过程时间表、显微镜下观察到的重编程过程中靶细胞形态变化。第12天,形成的iPS克隆表达多能型Marker TRA-1-81。
病毒、DNA载体等依赖的iPS重编程技术,其重编程效率介于0.00001%到1%之间不等,而Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System的重编程效率远远大于1%,极大地提高了iPS克隆的产出率。
表1. 不同类型iPS重编程手段效率比较
Reprogramming Method | Efficiency | Integrating | Screening |
RNA | >1% | No | No |
仙台病毒(Sendai virus) | 0.01-1% | No | Yes |
DNA载体(Episomal/Minicircle) | 0.00% | Possible | Yes |
慢病毒(Lentivirus) | 0.001-0.01% | Yes | Yes |
腺病毒(Adenovirus) | 0.0001-0.001% | Possible | Yes |
Protein | 0.00% | No | No |
某些iPS研究领域,例如iPS临床研究、治疗应用等,对iPS细胞的安全性提出了极高的要求。使用Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System重编程靶细胞,无需担心构建的iPS细胞系可能含有病毒载体残留,亦无需担心无关的基因整合进宿主基因组,是目前适用于临床研究及治疗的最理想选择。
而以仙台病毒(Sendai Virus)为载体的iPS重编程手段,其病毒基因组虽然不会整合进宿主染色体,仙台病毒本身也不具备复制能力,但是为了构建真正意义上的virus-free的iPS细胞系,通常需要经过一个10-20代、耗时费力的筛选过程,以确保最终得到的iPS细胞系无病毒载体残留。以慢病毒(Lentivirus)体的iPS重编程手段,病毒基因组能够永久整合进宿主基因组,会给后续的iPS细胞分析带来干扰。
以仙台病毒为载体的iPS重编程试剂盒非常昂贵,综合重编程效率、时间及劳动力成本、安全性等多重考虑,Stemgent® MicroRNA-Enhanced mRNA Reprogramming System无疑是性价比的上乘之选。